本文是一篇医药学论文，本文的目的是为优化临床治疗由敏感菌引起猪呼吸道疾病的给药方案提供科学依据，以望提高疗效同时减少细菌耐药性的产生。
1 前言
1.1 头孢喹肟概述
头孢喹肟（cefquinome）又称头孢喹诺，临床常用硫酸盐，是白色至淡黄色的粉末。头孢喹肟的化学名称为：1-[(6R，7R)-7-[[(2Z)-(2-氨基-4-噻唑基)(甲氧亚氨基)乙酰基]氨基]以2-羧基-８-氧代-5-硫杂-1-氮杂二环[4,2,0]辛-2-烯-3-基]甲基]-5,6,7,8-四氢喹啉内鎓盐，化学式表示为C23H24N6O5S2，其相对分子质量为564.8，化学结构式见图1，硫酸头孢喹肟的含量≥98.0%，头孢喹肟含量≥80.0%。在水中易溶，在乙醇中略溶，几乎不溶于氯仿。其商品名称叫克百特（Cobactan），是德国赫斯特动物保健品公司研发的的专门用于动物的第四代头孢菌素，于1993首次批准上市，并于2009年被列为我国二类新兽药，农业部开始批准国产的硫酸头孢喹肟注射液的生产，已经有各种国产制剂在市场上销售。头孢喹肟（cefquinome）内服几乎不被吸收，在肌内以及皮下注射的时候吸收非常迅速，达峰时间在0.5～2 h之间，生物利用度超过93%，体内分布并不广泛，表观容积约为0.2 L/kg。奶牛泌乳期乳房灌注给药后，可以迅速的分布于整个乳房组织，并维持相对较高的组织药物浓度。其在动物体内的排泄主要是以原形的形式经过肾脏随尿液排出机体外（陈杖榴，2009）。在牛的体内给药之后的4 h内，有50％～80％的原形药物经过肾脏随尿排出，24 h以内，约有90％的原形药物经肾脏随尿排出（刘美端等，2013）；经乳房灌注给药之后，药物主要以原形随乳汁排出体外（Knappstein et al., 2003），荣俊等（2008）研究了国产的硫酸头孢喹肟对小鼠的急性以及蓄积毒性，结果表明蓄积试验中无小鼠死亡，蓄积系数Ｋ＞5.3；耐受性试验结果表明，试验组死亡率（10％）要显著低于对照组（40％）（Ｐ＜0.05）。结论是国产的硫酸头孢喹肟毒性低，对小鼠没有蓄积毒性，临床使用非常安全。
1.2 头孢喹肟药动学
头孢喹肟（cefquinome）的脂溶性比较低，因为头孢喹肟（cefquinome）为有机酸（kPa 2.51～2.91），所以头孢喹肟（cefquinome）在动物体内分布不很广泛，表观分布容积比较低，头孢喹肟（cefquinome）与血浆蛋白的结合率比较低，范围在5%～15%。非胃肠道途径给药后，头孢喹肟（cefquinome）在注射部位组织以及肾脏、肝脏的药物浓度最高（陈杖榴，2009）。
头孢喹肟的药动学文献报道比较多，杨大伟等（2009）按照1mg/kg的剂量给猪颈部肌内注射后得到结果Tmax是0.32 h，Cmax是1.8 μg/mL，生物利用度达到102.37%，T1/2β是2.76 h，AUC为4.12 μg‧mL-1‧h，静注的T1/2β为1.34 h。刘利锋等（2009）给猪按照2 mg/kg的剂量肌内注射后得到药动学数据为Tmax=0.8±0.05 h，Cmax=2.44±0.24 μg/mL，T1/2β=2.28±0.49h，AUC=7.28±1.11 μg‧mL-1‧h，还有马、牛、山羊、犬等的药动学研究，头孢喹肟（cefquinome）在体内的半衰期分别为2～2.5 h、1.5～3 h、2 h、1 h（陈杖榴，2009）。说明头孢喹肟在动物机体内具有吸收迅速，分布不很广泛，达峰速度快，药物代谢速度快的药动学特征。
2材料与方法
2.1 药品与试剂
福威乐（硫酸头孢喹肟注射液）：批准文号：兽药字（2015）190172297，广东温氏大华农生物科技有限公司；
硫酸头孢喹肟对照品：头孢喹肟含量为80.1%，批号K0320906：中国兽医药品检查所； 林格氏液：叶源生物有限公司； 猪血浆：广州蕊特生物科技有限公司； 碘酊：河北瑞康医药科技有限公司 氯化钠注射液：广东科伦药业有限公司； 戊巴比妥钠：翔博生物科技有限公司； 盐酸普鲁卡因注射液：批准文号：国药准字H37022832，山东方明药业集团股份有限公司； 安痛定注射液：批准文号：（2016）兽药生产证字14012号，江西新世纪民星动物保健品有限公司； 乙腈：色谱纯：含量≥99.9%：Fisher Science公司； 甲醇：色谱纯：含量≥99.9%：Fisher Science公司； 甲酸：色谱纯：含量≥99.9%：Fisher Science公司。
2.3 试液与配制
1‰甲酸水：量取1000 mL的水加入1 L的蓝盖瓶中，用1 mL移液枪准确吸取1 mL甲酸加入到蓝盖瓶，超声30 min，放置室温；
头孢喹肟标准储备液：用高精度电子分析天平精密称取硫酸头孢喹肟对照品适量（以头孢喹肟的实际含量计算），置10 mL棕色容量品中，用超纯水定容至刻度线，涡旋混匀，超声10 min，制得1000 μg/mL浓度的头孢喹肟标准储备液，保存在4℃冰箱备用，一个月内使用；
头孢喹肟注射液：在给药前用2.5 mL注射器按猪只体重和产品剂量抽取硫酸头孢喹肟适量体积，现配现用；
巴比妥：用电子天平称取适量戊巴比妥纳，装入50 mL离心管中，加入适量超纯水，涡旋超声混匀，制得70 mg/mL浓度的戊巴比妥。
戊巴比妥：用电子天平称取适量戊巴比妥纳，装入50 mL离心管中，加入适量超纯水，涡旋超声混匀，制得70 mg/mL浓度的戊巴比妥。
3 结果 ·························· 19
3.1 头孢喹肟检测方法 ······························· 19
3.1.1 头孢喹肟标准曲线及检测限与定量限 ···················· 19
3.1.2 头孢喹肟回收率及变异系数 ·································· 21
4 讨论与结论 ··································· 25
4.1 关于头孢喹肟的检测 ······················ 25
4.2 关于微透析技术 ·································· 25
4.3 关于猪肺部微透析模型的构建 ······················· 26
5 全文总结 ·························· 30
4 讨论与结论
4.1 关于头孢喹肟的检测
目前关于头孢喹肟（cefquinome）的在猪血浆中的检测方法中，主要是应用高效液相色谱法（HPLC）来检测，刘利锋等（2009）用高效液相色谱法（HPLC）检测了给猪注射2 mg/kg剂量头孢喹肟（cefquinome）后的血浆药动学，得到主要药动学参数：Cmax为（2.44±0.44）μg/mL，Tmax为（0.8±0.05）h，药物消除半衰期（T1/2β）为（2.28±0.49）h。其中回收率可达90.67%以上，标准曲线相关性R2为0.9986，日内与日间精密度变异系数均小于10，此方法稳定性以及重现性都非常高。杨大伟等（2009）用高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）检测了肉汤中头孢喹肟的药物浓度。本实验基于杨大伟的高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS），用乙腈提取血浆中的药物上机检测。此方法样品前处理方法更简单，可节约样品分析的时间，同时还方便大批量处理血浆样品，因此我们最终选择使用高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）来检测血药浓度和微透析样品的药物浓度。
5 全文总结
（1）本实验使用了新的高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）检测头孢喹肟（cefquinome）的药物浓度，检测限（LOD）为2 ng/mL，定量限（LOQ）为5 ng/mL。
（2）本实验确定了微透析技术应用于测量猪肺组织中游离态的头孢喹肟（cefquinome）药物浓度的可行性。成功筛选出美国BASi公司型号为MD-2005的微透析探针（MD probes）采集猪肺组织中游离的头孢喹肟（cefquinome）药物浓度的最佳流速，最佳流速为1 μL/min。体内回收率为（0.24±0.06）。
（3）本实验成功运用微透析技术检测了猪肺组织中游离的头孢喹肟（cefquinome）药物浓度，初步总结出了微透析技术在猪肺组织药动学上的研究方法，为进一步探索肺部药动学的研究奠定了坚实的基础，也提出了实验还需进一步改进的地方，给后续实验提供了研究方向。
（4）本实验成功的给出了微透析实验过程中血浆药动学以及透析液药动学结果，并得到头孢喹肟（cefquinome）在肺部和血液的分布系数（AUC肺/AUC血液）为（2.25±0.76），结果表明头孢喹肟在猪肺部有较好的药物分布，为临床用药提供指导建议，但还需进一步实验评估动物病理情况对微透析技术研究肺部药物浓度实验的影响。
参考文献（略）
