本文是一篇医药学论文，本课题对于红平菇锌多糖的提取方法只对水提醇沉法进行了探究，后续试验在本文的基础上引入酸碱辅助或超声波辅助，对比效果找出更佳的提取方法。
1 前言
1.1红平菇
红平菇（Pleurotus djamor），又名粉褶侧耳，属于担子菌门（Basidimycota），伞菌亚门（Agaricomycotina）、伞菌纲（Agaricomycets）、伞菌亚纲（Agaricomycetidea）、伞菌目（Agaricales）、侧耳科（Pleurotaceae）、侧耳属（Pleurotus），是一种木腐菌，常出现于热带与亚热带地区阔叶林的枯木和树桩上，在泰国、柬埔寨、越南、巴西以及我国江西、四川等省均有广泛的分布（卯晓岚，1998；王贺祥，1988；熊芳等，2014）。目前我国红平菇的栽培品种主要为从印度、泰国引进的优良品种，极易成活与出菇，且具有生长快，生长周期短，产量高等优势（贺新生等，2011）。
红平菇的外形与平菇类似，呈现簇生或单生状态。菌盖直径15 cm，呈扇形、贝壳形，表面光滑，颜色随生长时期不同产生变化，最终呈现为淡红色。菌褶以菌柄为中心呈刀片状四散排列，聚集紧密，长短不均。菌柄较短，纤维质明显（迟全勃，2007；杨淑云等，2007）。
红平菇具有很高的营养价值，高蛋白，低脂肪，水分与脂肪也相对平菇较低，碳水化合物、纤维素和矿物质含量则高于平菇（迟全勃等，2015）。目前，红平菇在饮料、面包等食品加工中存在应用（罗茂春等，2010；周伟峰等，2013）。
1.2食用菌多糖
多糖又名多聚糖（Polysaccharide），指由10个及以上的单糖分子通过糖苷键连接的天然高分子化合物，通常由醛糖或酮糖组成（周启升等，2010），具有广泛且复杂的生物活性和功能，是维持生命活动必不可缺的物质，在自然界中，碳水化合物多以多糖的形式存在。多糖是相对复杂的碳水化合物，它被认为是地球上形成的第一种生物聚合物（Maity P et al., 2021）。来自不同的天然来源的多糖，例如植物、海藻、真菌、细菌胞外聚合物等，正逐渐被认为是有利于健康的补充品（Mo, 2022；Albuquerque P, 2022）。食用菌多糖指的是在食用菌的子实体、菌丝体、发酵液或菌糠中提取出的多糖类物质。目前，已经在分子生物学、免疫学、生物技术和药物化学等不同领域展现了极大地研究潜力，伴随着其在结构上例如分子质量、化学组成、三维构象等方面的独特性，不同种类的食用菌多糖展现出了多样的生理功能，例如抗氧化、抗衰老、抗炎、保肝护肾增强免疫等多种生物活性，同时已有多种食用菌多糖被用于肿瘤、糖尿病等多种疾病的治疗和预防的临床试验阶段，并进一步通过测试应用于临床（Yin et al., 2021；Yu et al., 2015；荆慧娟，2018）。
2 材料与方法
2.1材料
2.1.1菌种
红平菇（P. djamor），购买自寿光食用菌研究所，本实验室自行传代培养。
2.1.2培养基
液体发酵培养基（g/L）：马铃薯 200 g，葡萄糖 20 g， KH2PO4 1.5g，MgSO4·7H2O 1g，水 1000 mL，pH 自然。
2.1.3主要试剂
2.2试验方法
2.2.1红平菇菌丝体富锌培养
2.2.1.1红平菇液体培养
将活化后的红平菇接种到PDA平板，25℃培养7d。用灭菌后的药匙取1 cm2培养基块置于装有500 mL液体培养基的接种瓶中。室温静置过夜后，160 rpm振荡培养7d。
2.2.1.2 Zn2+培养浓度的筛选
以乙酸锌作为锌源配置不同梯度的Zn2+浓度的液体培养基，浓度设定为0、10、30、50、70、90 mg/L，每个浓度3组平行。在长满菌丝体的平皿培养基上取一块约1 cm2的菌种块接入盛有200 mL液体种子培养基的250 mL三角瓶中，25 ℃静置24 h后，130 rpm振荡培养7 d。离心，将菌丝体60 ˚C 烘干至恒重，测定菌丝体生物量（g）。
生物量(gL)=菌丝体干重(g)/ 发酵液体积(mL )×1000 （1）
2.2.2 PZP的提取优化
2.2.2.1 多糖的提取
将活化后的菌种接入装有70 L含锌液体培养基的控温发酵罐中通气培养，26 ℃培养10 d左右。将所得菌丝体烘干后粉碎，将粉末与去离子水按照适宜比例混合，90 ℃水浴4 h，保留提取液，加水重复3次并浓缩提取液，3000rpm 离心10min取得上清液，后与3倍体积乙醇（95%，v/v）充分混合，4 ℃静置过夜。醇沉结束后，将所有液体以 3000 rpm离心10min，弃去上清液，只保留沉淀，干燥后得到红平菇富锌粗多糖。
3 结果与分析 ............................................. 19
3.1 Zn2+对红平菇菌丝体生长的影响 ................................. 19
3.2红平菇锌多糖提取优化 ............................ 20
4 讨论 ................................ 44
4.1 红平菇锌多糖提取优化 ................................. 44
4.2 咀嚼片的研制 ..................................... 44
5 结论 ............................... 50
4 讨论
4.1 红平菇锌多糖提取优化
目前很多的研究表明，食用菌能够表现出富集微量元素的能力。这些微量元素被富集到食用菌体内后会与多糖、蛋白质等食用菌细胞内部的有机物结合转化为有机态。有机物形式的微量元素能够更好地被人体所吸收利用，同时也失去了无机态下所带的毒性，这对于微量元素的开发利用具有重要意义。锌作为人体生长发育所必需的微量元素之一，无机状态下的它人体吸收起来并不容易，而且有一定毒性，所以开发一种生物来源的有机态锌产品是具有意义的。因此本课题便利用在液体培养基中添加锌元素通过液体发酵培养红平菇菌丝体，使锌富集到菌丝体体内从而得到锌多糖。
利用液体发酵培养菌丝体，培养基的成分对于菌丝体的生长速度与产量有很大的影响，富锌培养过程中培养基中外来锌源的浓度过高过低都影响菌丝体的生长，因此本试验探究了培养基中的最优的锌浓度，确定了能够使红平菇菌丝体最快生长的培养基成分。同时为了提高多糖得率与节约成本，对多糖的提取条件进行优化，利用PB试验与RSM试验确定了最佳条件。在赵化杰（2020）的文献中，其对黑皮鸡枞（Oudemansiella raphanipies）菌丝体多糖的提取条件进行优化，发现在提取温度、提取时间、加水体积和pH设置为90 ℃、3.5 h、30 mL和7时可以得到最佳得率1.67±0.14 %。在孔德印（2021）的试验中，当提取温度86 ℃，乙醇浓度87 %，醇沉时间23 h时提取黑皮鸡枞菌根多糖可以得到最好的效果，得率达到3.34±0.16 %。本试验得出了相似的结论，对重要的影响因素醇沉时间、料液比和提取时间进行了优化，最高得率可达1.04 %。对于得率出现不同的原因可能是所用菌种与材料的形式不同所导致。
5 结论
（1）液体发酵培养时，培养基内添加50 mg/L乙酸锌时菌丝体得率较高。PZP提取的最优提取条件为料液比1：30.99、提取时间2.46 h、醇沉时间15.29 h，预测得率1.06 %。在料液比为1：31.00、提取时间为2.5 h、醇沉时间为15 h的条件下验证，实际得率为1.04±0.03 %。
（2）Zn-PCT的最佳工艺配比为红平菇锌多糖25.0 %、木糖醇25.0 %、柠檬酸1.5 %、硬脂酸镁1.0 %。所得片剂感官评价39.7±0.9分，表面光滑、口感细腻、酸甜可口，硬度适中。
（3）Zn-PCT表现出了良好的体外抗氧化能力，在1.0 mg/mL浓度下，对羟基自由基、超氧阴离子、DPPH自由基的清除率分别达到了39.1±1.07 %和29.4±1.77 %、22.6±1.69 %。
（4）Zn-PCT能减轻睾丸组织损伤，在改善机体抗氧化能力，提高雄性激素水平，抑制睾丸细胞凋亡，减轻睾丸内炎症因子的表达等方面发挥缓解雄性小鼠生殖损伤的功效。
参考文献（略）
